PCR實驗室建設所（suǒ）需資料
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1周前
4月26日，國家衛健委舉辦全國視頻會議，明確提（tí）出（chū）“所有縣區級（jí）以上疾控機構、二級以上綜合（hé）醫院要抓（zhuā）緊進行改造，在短時（shí）間內形（xíng）成核酸檢測能力”。
各地的公立機構檢測能力不能滿足（zú）需求隻是暫（zàn）時的，獨立醫學實驗室在充實檢測力量的同時，發揮自己豐富的檢驗管理運營理念，以及區域（yù）化覆（fù）蓋的經驗優勢，融入到“國家隊”核酸檢測能力的建（jiàn）設中，順勢而為，乘勢而上。
隨著各地都在建立PCR實驗（yàn）室，本文從硬件基礎的角度，梳理了PCR實驗室建（jiàn）設（shè）的幾個關鍵點，獨（dú）立醫學實驗室可以運用（yòng）豐富的（de）運營經驗（yàn），進行（háng）建設指導、人員（yuán）梯隊建立、質（zhì）控體係搭（dā）建、區域化服務支持等。
如何建設PCR實驗室
與PCR實驗室建設相關的指導文件主要有四份（fèn）：
《醫療機構管理（lǐ）條例》
《醫療機構臨床實驗室管理（lǐ）辦法》
《臨床基因擴（kuò）增檢（jiǎn）驗（yàn）實驗（yàn）室（shì）管理暫行辦法》
《醫療機構臨床基因擴增實驗（yàn）室管理辦法》
要求（qiú）臨床PCR實驗室（shì），不但在實驗（yàn）室設置及儀器設備等硬件上（shàng）要滿足開展臨床檢（jiǎn）驗（yàn）的條件，而且要（yào）求實驗室在日常工作要有文件化的工作程序。
下麵就在PCR實驗室建設過程中的幾（jǐ）個關鍵控（kòng）製點進行（háng）闡述:
01
建立PCR實驗室質量管理體係
根據實驗室的具（jù）體情況編寫質量體係（xì）文件，《質（zhì）量手冊》、《程序文件》、《作業指導書》，並保證管理體係運行有效。
管理（lǐ）體（tǐ）係的特點是應有明確的目的、規範的管（guǎn）理、有效的（de）製約、高效的機製（zhì）、能自我發展（zhǎn）的整體。
建立完善的SOP文件，對完成各（gè）項質量活動的方法作出規定，每個SOP都應對（duì）一個或一組相互（hù）關係的活動進行描述。
每個SOP文件應說明該項質量各環（huán）節（jiē）的輸入、轉換和輸出所需的文件、物資、人員、記錄以及它們與有關活動的接口關係。
明確每個環節轉換過程中各（gè）項因素（sù）的要求，即由誰做、做什麽（me）、做到什麽程序、達到什麽（me）要求，如何控製、形成什（shí）麽（me）記錄和報告，以及相應的審批手（shǒu）續。
規定在質量活動中需要注意（yì）的例外或特殊情況的糾正措施。SOP應簡（jiǎn）練、明確和易懂（dǒng）並且工作人員（yuán）熟練掌握和嚴格遵守。
02
PCR實驗室的相關設置
要完成一組PCR實驗，通常需要經過試（shì）劑配製、樣品處理、核酸擴增和產物分析（xī）4個實驗過程。
這4個實驗過程的實驗用房應相鄰布置，組成一個（gè）獨立的PCR實驗區。標準的PCR實驗區包括:試劑準備區、標本製備區、擴（kuò）增區、產物分析區、各區配套的緩衝區及公共走廊。
PCR實（shí）驗室整體平麵布局
某醫院PCR實驗室平麵布局如（rú）圖1所示，整個區域有一個公用走廊，每個獨立實驗區設有（yǒu）專（zhuān）門的緩衝區。通過壓差控（kòng）製，使整個PCR實驗過程中試（shì）劑和標本免（miǎn）受氣溶膠的汙染，並且降低擴增產（chǎn）物對人員和環境的汙染（rǎn）。
圖表1、某醫院PCR實驗室平麵（miàn）圖
試劑準備區（qū）
該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的製備、試劑的分（fèn）裝和主反（fǎn）應混合液的製備。
試劑和（hé）用於標本製作的材料應直（zhí）接運送至該區，不得（dé）經過其他區域（yù）。試劑原材料必須貯存（cún）在（zài）本區內，並在本區內（nèi）製備成所需的貯存試（shì）劑。
試劑準備區配備有（yǒu）2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷負荷時，需要（yào）將它們計算在內。
房間的麵積宜控製在15m2~20m2。本區（qū）的壓力梯度要求為:相對正壓狀態，以防止外界含核酸（suān）氣溶膠的空氣進入，造成汙染。
標本製備區
該區域主要進（jìn）行（háng）的操作為臨床標（biāo）本的保存、核酸(RNA、DNA)提取（qǔ）、貯存及其加入至擴（kuò）增反應管和測定RNA時cDNA的合成。
標本製備區配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計（jì）算在（zài）內。在標本製備區，還需要配備生物安全櫃，用於進行提取核酸的操作。
為避免提取的核酸在櫃（guì）內反複（fù）循環，造成標本之間的交（jiāo）叉汙染，出現假陽性結果，該區（qū）域配備的生物安全櫃必須是B2型的。生物安全櫃工作區垂直氣流全部來自實驗室，排風經過高效過濾器(www.gdlingjie.net)過濾後直接排至室外，不允許回到安全櫃和實驗室中。
根據經驗，如（rú）果實驗室內配備生物安全櫃，每（měi）配備一（yī）台，實（shí）驗室的麵積增加10m2;標本製備區的麵積宜在25m2~30m2之間。本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠（jiāo）汙染。
擴增室
該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已製備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本製備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和製備區)製（zhì）備成反應混合液等也可（kě）在本區內進行。
在巢式PCR測定中，通常（cháng）在第一輪擴增後必須打開反應管，因此巢式擴增有較高的汙染危險性，第二次加樣必須在本區內進行。
擴增室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，本文實例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。
在實驗室建造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正常工作。該區麵積控製在15m2~20m2。
本區的壓力梯（tī）度要求為:相對於鄰近區域（yù）為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出（chū）。為避免氣溶膠所（suǒ）致的汙染，應盡量（liàng）減少在本區內的（de）不必（bì）要的走動。個別操作如加樣等應在超（chāo）淨（jìng）台內進行。建議采用5~10Pa壓差，在控製上（shàng）比較（jiào）容易實現。
產物分析區
該區域主要（yào）進行的操作（zuò）為擴增片段的測定（dìng）。如使用全自（zì）動封閉分析儀器檢測，此區域可不設。
在室內配（pèi）備通風櫥，保證房間內的相對負壓，空氣從室外流向室內。該區麵積控製在15m²~20m²。
本區是最主要的擴增產物汙染來源，因此（cǐ）對本區的（de）壓力梯（tī）度的要求為:相對於鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。建議采用5~10Pa壓差，在控製上比較容易實現。
03
正負（fù）壓區域緩衝（chōng）室的設置
根據壓力梯度的要求，試劑配製室和樣品處理室為相對正壓，擴增室和產（chǎn）物（wù）分析室為相對（duì）負壓，要求正壓的區域和要（yào）求負壓的區域的緩衝室內的（de）壓（yā）力設計大不相（xiàng）同。
正壓緩衝室（shì）符合（hé）一般（bān）正壓潔（jié）淨室的（de）緩衝原則，主（zhǔ）要（yào）是防止室外環境空氣中的氣溶膠進入室內。正壓緩衝室的布置（zhì）如圖（tú）2所示。
圖表2、正壓緩衝室的布置圖
負壓緩衝室（shì）則是要（yào）求緩衝室對核酸擴增室及產物分（fèn）析區保持正壓，對緩衝室外也保持正壓（yā）(主要是滿足室內（nèi）淨化需（xū）要，如室內無（wú）潔淨要求，此處可以為0壓)。負壓緩衝室的布置如圖3所示。
圖表3、負壓緩衝室（shì）的布置圖
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